VitalScreen

При условии правильного хранения и использования после вскрытия реагенты можно использовать до истечения срока годности (24 месяца после производства).

Проанализируйте слайд сразу после окрашивания. Нигрозин токсичен для сперматозоидов. Если не просмотреть слайд незамедлительно, подсчитанное значение может быть ложноположительным

Нет, лучше нанести каплю на предметное стекло микроскопа и накрыть покровным стеклом.

A. Стандартный внутренний тест контроля качества от FertiPro

1. Подсчитайте подвижность нативного образца
2. Смешайте 50 мкл образца с 2 каплями эозина (реагент 1) из новой партии.
3. Через 30 секунд добавьте 3 капли нигрозина (реагент 2) из новой партии.
4. В течение 30 секунд поместите 19,5 мкл этой смеси на предметное стекло микроскопа и накройте его покровным стеклом.
5. Немедленно подсчитайте не менее 100 сперматозоидов (красные — мертвые,
   бесцветные/белые — живые)
6. Повторите эти шаги со старой партией.
7. Сравните результаты старой и новой партии
8. Интерпретация: % мертвых ≤ % неподвижных или % мертвых максимум на 20% выше, чем %неподвижных, и результаты не должны отличаться более чем на 10% между старой (эталонной) и новой партией.

B. Этаноловый тест
Измерение жизнеспособности нативного образца

1. Смешайте 50 мкл образца с 2 каплями эозина (реагент 1).
2. Через 30 секунд добавьте 3 капли нигрозина (реагент 2).
3. В течение 30 секунд поместите 19,5 мкл смеси на предметное стекло микроскопа и накройте покровным стеклом.
4. Немедленно подсчитайте не менее 100 сперматозоидов (красный = мертвый; белый = живой) Добавьте в образец этанол так, чтобы конечная концентрация этанола в образце составила 21%.
   Все сперматозоиды погибнут через 5 минут.

Измерение жизнеспособности образца с помощью этанола

1. Смешать 50 мкл образца/этанола с 2 каплями эозина (реагент 1)
2. Через 30 секунд добавьте 3 капли нигрозина (реагент 2).
3. Через 30 секунд поместите 19,5 мкл смеси на предметное стекло микроскопа и накройте покровным стеклом.
4. Немедленно подсчитайте не менее 100 сперматозоидов (красный = мертвый, белый = живой)

Должно быть четкое различие между нативным образцом и образцом, обработанным этанолом.
Количество мертвых клеток должно быть выше в образцах, обработанных этанолом

Компания FertiPro производит двухэтапный набор с нигрозином. Это необходимо для того, чтобы живые клетки (которые не окрашиваются в красный цвет) были четко видны, поскольку нигрозин обеспечивает темный фон. Однако второй шаг можно изменить, уменьшив количество нигрозина, добавленного в смесь, что приведет к более светлому фону. В качестве альтернативы второй шаг можно также пропустить, но это может привести к более сложному считыванию количества живых сперматозоидов.