Вы всегда можете обратиться к полной версии каталога, чтобы изучить весь ассортимент продукции
Мы будем рады если вы также оставите отзыв о продукции, поскольку нам важен ваш практический опыт
Набор для анализа фрагментации ДНК — CANfrag разработан Candore BioScience с целью выявления нарушений целостности ДНК в человеческой сперме. Благодаря усилиям команды Candore BioScience набор стал простым в использовании и удобным для применения.
Принцип действия набора CANfrag основан на использовании метода SCD, который позволяет получать воспроизводимые и надежные результаты. Методика SCD предполагает три основные этапа:
Погружение сперматозоидов в агарозный гель позволяет зафиксировать их на предметном стекле. Раствор денатуранта денатурирует двойную спираль ДНК, а лизирующий раствор расщепляет ядерные белки сперматозоидов, позволяя высвободить хроматин.
Если в ДНК есть разрывы, происходит массивное отделение фрагментов, оставляя сперматозоид без рассеивающего ореола вокруг ядра.
Если ДНК целостная, вокруг головки виден рассеянный ореол нуклеиновых кислот.
Таким образом, мы можем наблюдать сперматозоиды с ореолом или без рассеивающего ореола вокруг головки.
Для расчета индекса фрагментации (DFI) необходимо подсчитать не менее 200 сперматозоидов и подсчитать фрагментированные формы. Отношение между количеством фрагментированных форм к общему количеству будет являться индексом фрагментации (DFI).
Принято считать, при значении DFI <15% (низкий DFI) регистрируется норма. При значении DFI >30% (высокий DFI) регистрируется высокая степень фрагментации ДНК, ассоциированная с мужской репродуктивной дисфункцией.
Фрагментация ДНК в сперме может быть причиной мужского бесплодия, которое не определяется с помощью анализов обычных параметров спермы, таких как концентрация, анализ подвижности и оценка морфологии сперматозоидов, поэтому рекомендуется как дополнение к рутинному анализу спермы.
Срок годности — 12 месяцев с даты изготовления.
Набор должен храниться при температуре 5-25°C.
Вы всегда можете обратиться к полной версии каталога, чтобы изучить весь ассортимент продукции
Если количество сперматозоидов в образце спермы больше необходимого, разбавьте образец фосфатным буферным раствором (PBS) или средой для приготовления спермы до концентрации около 15-20 млн/мл. Если количество — меньше, центрифугируйте образец спермы при 800-1000 об./мин. в течение 10 минут, а затем приступайте к подготовке слайда.
Для поддержания температуры 90°C для расплавления геля можно использовать кипящую водяную баню или сухую ванну, а для поддержания температуры 22°C — охлаждающие пластины.
После нагревания пробирки с гелем при температуре 90°C не допускайте, чтобы температура геля опускалась ниже 37°C, так как гель обладает свойством затвердевать при охлаждении. Приступайте к приготовлению слайдов немедленно, как только температура во флаконе достигнет почти 37°C.
Набор применим для свежих, разбавленных, замороженных/размороженных и обработанных образцов спермы.
Неравномерное распределение геля и образование пузырьков на предметном стекле при наложении покровного стекла может нарушить целостность геля.
После помещения образца на предметное стекло поддерживайте правильную температуру и контролируйте время, чтобы гель затвердел должным образом.
Рывки при наложении раствора могут повлиять на целостность геля, поэтому наносите раствор аккуратно.
Всегда готовьте свежий краситель перед тем, как приступить к окрашиванию слайдов. Если окраска слишком темная, полностью отмойте слайд 100% этанолом, высушите на воздухе и снова окрасьте, уменьшив время окрашивания, но сохранив остальные условия прежними. Если слайд получился светлым, отмойте его 100% этанолом, а затем снова окрасьте, увеличив время окрашивания.
Избегайте добавления образца спермы, когда гель в пробирке с агарозным гелем слишком горячий, поскольку высокая температура влияет на ДНК сперматозоидов. Также избегайте интенсивного перемешивания образца спермы и образования пузырьков в геле, поскольку это в конечном итоге влияет на целостность ДНК.
DFI (индекс фрагментации ДНК) — это процентное отношение количества сперматозоидов с фрагментированной ДНК к общему количеству сперматозоидов. Фрагментация ДНК в сперме может быть причиной мужского бесплодия, которую невозможно обнаружить с помощью оценки обычных показателей спермы, таких как концентрация, подвижность и морфология сперматозоидов.
Для расчета значения SDF можно использовать следующее уравнение:
Значение SDF (%) = (Количество фрагментированных сперматозоидов, оцененных как фрагментированные / Общее количество сперматозоидов, оцененных как фрагментированные) X 100
Наш сайт использует файлы cookie. Продолжая использовать сайт, вы соглашаетесь на использование обработку этих файлов.
